m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）技术服务-康成生物丨数谱生物

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m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）技术服务

简介
服务特点
样本要求
结果展示

当前的研究发现，很大一部分m6A修饰发生在含有核心ACA序列的保守motif区域，通常称为是m6ACA位点。康成生物丨数谱生物提供对RNA上潜在m6ACA位点进行检测或验证的技术服务——m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）。

RNA内切酶MazF识别RNA单链并在非甲基化的ACA位点的5’端进行切割，而不能切割甲基化的m6ACA位点(图1)。

图 1. MazF可以在非甲基化ACA位点切割，而无法在甲基化m6ACA位点发挥作用

将抽提的总RNA样本分为两份，一份不加MazF处理，另一份加MazF处理后。然后通过实时定量PCR技术进行检测（图2）。最后，经过数据分析处理得到检测的样品中特定ACA位点的m6A甲基化水平。

图2. m6ACA位点PCR检测（MazF酶切法）实验原理

mRNA&lncRNA m6ACA位点检测：RNA m6ACA位点预测→total RNA提取&质检→一份MazF酶处理，一份不加MazF酶处理→反转录成cDNA→目标m6ACA位点PCR检测

CircRNA m6ACA位点检测：RNA m6ACA位点预测→total RNA提取&质检→RNase R消化线性RNA，保留circRNA→ 一份MazF酶处理，一份不加MazF酶处理→反转录成cDNA→目标m6ACA位点PCR检测
●对m6A单位点的相对定量检测
●对m6A位点高度敏感的核糖核酸内切酶MazF
●通过严格测试的特异性引物
样本类型：新鲜组织、细胞或total RNA
样本量：
mRNA&lncRNA m6ACA位点检测：：≥2μg total RNA或者能获得相应份量的组织细胞，最低浓度不低于50ng/μl。
CircRNA m6ACA位点检测：≥10μg total RNA或者能获得相应份量的组织细胞，最低浓度不低于50ng/μl。
样品质量：A260/A280为1.9~2.2；无基因组DNA污染；RNA无降解。
样本运输：RNA样品使用RNAase-Free离心管保存，封口膜封口后干冰运输；组织细胞样品RNAase-Free冻存管保存，干冰或液氮运输。

m6ACA位点PCR（MazF酶切法）可对单个m⁶ACA修饰位点进行检测（以下为示例展示）。

sample	MazF-(Ct)	MazF+ (Ct)	Methylation ratio %
1	22.970	23.354	76.611
2	22.968	23.854	54.101
3	22.980	24.774	28.856
4	23.033	27.340	5.051
5	23.006	28.308	2.535
6	23.008	30.821	0.452

m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）技术服务

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