多色荧光原位杂交技术(M-FISH)的基本原理及应用

荧光原位杂交技术(fluorescence in situ  hybridization，FISH)是根据核酸碱基互补配对原理，用半抗原标记DNA或者RNA探针与经过变性的单链核酸序列互补配对，通过带有荧光基团的抗体去识别半抗原进行检测，或者用荧光基团对探针进行直接标记并与目标序列结合，利用荧光显微镜直接观察目标序列在细胞核、染色体或切片组织中的分布情况。M-FISH则是在荧光原位杂交基础上发展起来的新技术，它不仅具有FISH的优点，而且克服了FISH的许多局限，其特点是可将多次繁琐的FISH实验和多种不同的基因定位在一次FISH实验中完成。M-FISH能同时检测多个基因，分辨复杂的染色体易位和微小缺失，区分间期细胞多倍体和超二倍体等。M-FISH用激发光谱和吸收光谱不同的荧光索按一定调色方法标记不同的探针，从而对不同靶DNA同时进行定位和分析，并能对不同探针在染色体上的位置进行排序。
 

探针荧光素颜色调配的方法有非调色法，混合调色法和比例调色法。这3种调色法中，比例调色法只需要几种荧光素就可标记多种探针，因而更有发展潜力。染色体描绘、比较基因组杂交、光谱染色体自动核型分析、交叉核素色带分析及多彩色原位启动标记等技术都是在 M-FISH的基础上发展起来的。
 

与其他原位杂交技术相比，多色荧光原位杂交具有很多优点，主要体现在：

①宜于多靶杂交，可对同一个细胞学制片进行多个探针杂交；

②通过在同一个核中显示不同的颜色可一次性显示全部的染色体数量或结构的变化；

③能检测到传统显带方法不易发现的亚纤维染色体畸变不仅能够鉴定隐藏的易位和复杂的重拍，而且可以分析与肿瘤发生相关的重要标记染色体及其基因。

目前该项技术目前已广泛应用于动植物基因组结构研究，染色体精细结构变异分析，病毒感染分析，微生态分析，肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。

明美 MFISH荧光原位杂交分析系统 就是一款专为荧光显微图像的捕捉和处理而开发的实用图像软件。它搭配不同波段光谱滤光片的荧光显微镜以及高灵敏度的相机可对多种探针信号进行检测成像，还有区域自动曝光，自动着色，信号点增强，一键合成多色荧光通道图像，自定义各种颜色的探针，多焦面信号景深叠加，多层图像位置偏移较正等功能。
 

深圳禾正医院的老师采用了明美的 MFISH荧光原位杂交分析系统，检测中用her2/cep17的比值来测定是否有此原癌基因扩增，当HER2／CEP17比值≥2.0时，为HER2阳性；此外老师还定制了双通道 荧光模块，可以同时在目镜下观察到红绿两种颜色的信号点，大大提高科室的工作效率。

来源： http://www.mshot.com/article/903.html