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【求助】我的cDNA图怎么像RNA电泳图？！求解！！！
浏览 4690 ·讨论 3
fengye203楼主
发布于 2012-10-06IP
只看楼主
这个帖子发布于 11 年零 353 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我要做有关鱼的免疫基因的荧光定量，用试剂盒提的总RNA，效果不错，OD值基本在1.8到2.10之间，大部分RNA浓度是在250ng/ul-400ng/ul左右，但有些测的浓度很低，列如胸腺就只有5、60到200之间！电泳看图，大部分上只有28S和18S！根据图来说，做荧光定量的反转是没问题的！
我反转录前调了RNA的浓度，基本在1.0-1.5ug！
我反转录使用用的Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒，引物用oligo dT(18) 0.5ul和random primer 1ul，但是反转录后的电泳图大部分抹带暗，不清晰，而28S和18S却很亮？！！！求解，为什么会出现这样的情况啊？！！！！这样的cDNA可以用来做荧光定量吗？！
因为图在电泳的电脑里，暂时没有拷贝过来，先描述，大致是这样！求解！！！！
我反转录前调了RNA的浓度，基本在1.0-1.5ug！
我反转录使用用的Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒，引物用oligo dT(18) 0.5ul和random primer 1ul，但是反转录后的电泳图大部分抹带暗，不清晰，而28S和18S却很亮？！！！求解，为什么会出现这样的情况啊？！！！！这样的cDNA可以用来做荧光定量吗？！
因为图在电泳的电脑里，暂时没有拷贝过来，先描述，大致是这样！求解！！！！
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lime哼唧
我
我也是提的总RNA做的反转，这是我今天做的cDNA电泳图（请忽略我跑得丑丑的marker，我也不知道为啥我每次跑marker都会跑成w型，而跑样品不会这样）
图一是只用oligo反转的，图二是只用random反转的，图三是oligo：random=1:1反转的，我的试剂盒与楼主一样，RNA的量是2ug，引物总量1ul
图二也是12个样 在另一张图上，就不放上来了，我就是想看看oligo和random反转后的电泳，因为我之前都是只用oligo，上次意外的跑了次cDNA电泳，但有人说oligo反转的电泳是弥散的，我还以为是我反转有问题，所以做了这个实验。
其实我觉得random反转的才应该是弥散的（如图二、三）因为它反转的是total RNA 各种长度的cDNA都应该有，所以是弥散的
本人还是实验室新人，要是有说得不对的地方还请各位指导。
刚刚才发现，已经是五年前的帖子 哈哈哈 反正已经写了
2017-08-19IP 北京北京
zhaou
cDNA合成中，用了同样的酶，出现了和你一样的结果。很不解。顶一下，期待有高手帮分析一下。
2012-10-07IP 内蒙古内蒙古
mpark
Why don't you detail your reverse transcriptions and show some first stranded cDNA pictures?
2012-10-07IP 美国美国
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