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克隆用PCR酶选购攻略
千里之行,始于足下;基因克隆,始于PCR。
为了获得令人满意的克隆结果,您可以采用限制性内切酶处理、TA克隆及In-Fusion无缝克隆等多种方法。但是无论哪种选择,通过PCR获得目的DNA片段,都是非常重要的操作环节。
这其中,PCR酶作为PCR反应液中的重要组成部分,在合成新的DNA链中起着关键的作用。因此,选择合适的PCR酶,是克隆实验成功的关键一步。
今天,就让小编带大家来详细了解一下,克隆用PCR酶应该怎么选?
攻略一:克隆的重中之重是保真性!
产品推荐: PrimeSTAR®系列高保真酶,克隆用PCR酶的理想选择!
PrimeSTAR®系列具有很强的3'→5'外切酶活性,保真性优于Takara Bio的其他任一种PCR酶。此外,该酶兼具很高的反应性能,可谓是克隆用PCR酶的理想选择。
PrimeSTAR®系列包括保真性高、且能快速进行PCR反应的【 PrimeSTAR® Max】、长链及GC rich样品也能良好扩增的【 PrimeSTAR® GXL】、无偏差基础款高保真酶【 PrimeSTAR® HS】等,请根据实验目的进行选择。
■ 错误率低!PrimeSTAR®系列与其他各种PCR酶的保真性能比较
■ PrimeSTAR®系列的特点
攻略二:唯快不破!如何加速获得基因克隆实验结果!
产品推荐: PrimeSTAR® Max DNA Polymerase(Code No.R045) + In-Fusion®,克隆实验黄金组合!
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase是兼具快速延伸性和高保真性的DNA聚合酶。利用酶自身的高priming效率和特别添加的延伸因子,可大幅缩短退火时间和延伸时间,实现了高速PCR反应。
■
快速PCR反应的扩增效率
■ 多个DNA片段同时进行克隆
攻略三:PCR有麻烦,多个扩增困难因素同时存在,怎么办?
产品推荐:高成功率PCR 酶- Tks Gflex™ DNA Polymerase(Code No.R060)
■ 使用改良α型聚合酶、通过添加改良型延伸因子提高反应性能
通过对α型聚合酶进行改良、抑制了酶自身对于DNA模板的非特异性扩增以及过剩结合。 此外,通过添加改良型延伸因子,使得DNA合成能够连续顺畅的进行,从而提高反应性能。增加延伸性、能够稳定的获得足够长度的扩增产物。(图1)
■ 通过背景降低因子的添加大幅提高了反应的特异性
通过【背景降低因子】提高引物特异性结合,从而大幅减少非特异性扩增(图2)。
■ 多个扩增困难因素存在条件下的PCR
[制品一览表]
制品名称 |
包装量 |
Code No. |
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase |
250 U |
R010A |
1,000 U |
R010B (A × 4) |
50 U |
R010Q |
PrimeSTAR® HS (Premix) |
50 μl反应 × 100 次 |
R040A |
50 μl反应 × 40 次 |
R040Q |
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer |
250 U |
R044A |
1,000 U |
R044B (A × 4) |
125 U |
R044Q |
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase |
50 μl反应 × 100 次 |
R045A |
50 μl反应 × 400 次 |
R045B (A × 4) |
50 μl反应 × 25 次 |
R045Q |
PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase |
50 μl反应 × 200 次 |
R050A |
50 μl反应 × 800 次 |
R050B (A × 4) |
50 μl反应 × 40 次 |
R050Q |
PrimeSTAR® GXL Premix |
50 μl反应 × 200 次 |
R051A |
50 μl反应 × 800 次 |
R051B (A × 4) |
50 μl反应 × 40 次 |
R051S |
Tks Gflex™ DNA Polymerase |
250 U |
R060A |
1,000 U |
R060B (A × 4) |
50 U |
R060Q |
In-Fusion HD Cloning Kit |
10 Rxns |
639648 |
50 Rxns |
639649 |
100 Rxns |
639650 |
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更多详情请点击:
高保真酶:PrimeSTAR系列 |
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