DC和T细胞的共培养实验

在各种研究中，根据所研究的疾病及其目的，可以对各种免疫细胞进行共培养并进行评估。分析方法可以相互转换和调整。

示例

人源DC和T细胞的共培养以及T细胞的多色流式细胞术分析

A)将野生型的RSV及其NS1/2缺失突变体预先感染的人DC，然后与自体CD8+或CD4+T细胞进行共培养。 从外周血单核细胞进行体外诱导生成未成熟DC，并用CellVue Lavender染料或DDAO标记。CD8+和CD4+T细胞分别通过阴性选择和阳性选择从来自同一供体的淋巴细胞中分别纯化。DC分别接种野生型 RSV或NS1/2缺失突变体(MOI为2 PFU/细胞)，SEB处理或阴性对照处理4 h，与纯化的已经使用CSFE标记的CD8+或CD4+T细胞共培养7d。共培养上清中的细胞因子含量使用ELISA分析，T细胞进行细胞因子和活性标志物染色后，实施多色流式细胞检测。(B)采用流式细胞检测技术对CD8+和CD4+T细胞进行画门和分析。每个细胞阶段所代表的细胞亚型子集用红色表示:圈门1，活/死细胞染色与DC标记(CellVue Lavender或DDAO)去除DC和死T细胞;圈门2，抗CD3抗体实施活/死细胞染色，得到活的CD3+T细胞;圈门3,CD8和CD3双染，以确保CD8+T细胞的CD3+CD8+表型;圈门4，前向散射高度vs前向散射面积，获得单细胞群;圈门5，侧散射区与前散射区对比，检测细胞大小和粒度;圈门6,CD3和CFSE双染获得增殖的CD3+T细胞，检测原理是随着细胞分裂，CFSE浓度会被稀释。

参考文献 

Munir S, Hillyer P, Le Nouën C, et al. Respiratory syncytial virus interferon antagonist NS1 protein suppresses and skews the human T lymphocyte response. PLoS Pathog. 2011;7(4):e1001336. doi:10.1371/journal.ppat.1001336