miRNA靶点预测及验证之合成篇

miRNA靶点预测

miRNA(microRNA) 是一类长度约19-24nt的非编码单链RNA，通过碱基互补配对的方式与靶基因的3'UTR区部分或完全互补，剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译，从而起到转录后调控靶基因表达的作用。

当前，miRNA对靶基因的功能研究仍然是世界研究热点之一。一般研究思路为：(1) 利用生物信息学方法准确快速地预测miRNA的靶基因，为研究miRNA功能提供线索; (2) 再利用荧光素酶报告基因检测系统验证miRNA对靶点的作用。泓迅科技可为您提供miRNA报告基因载体构建服务，您只需要提供目的miRNA靶位点序列，专业技术人员即可替您完成载体构建，为您节省大量的时间和精力。

利用基因合成方法可以快速构建含靶基因3'UTR的双荧光素酶报告基因载体，将其与表达pre-miRNA的质粒或化学合成的miRNA mimics共转染细胞后，可进行双荧光素酶检测，进一步验证目的miRNA的靶位点。

1. miRNA靶点的预测利用Targetscan、miRDB、PicTar软件预测靶基因3'UTR与miRNA的结合位点。

2. 根据软件预测的靶基因3'UTR与miRNA的结合位点，直接进行基因合成，插入到双荧光素酶报告基因载体上，构建含靶基因3'UTR的双荧光素酶报告基因载体。

3.合成相应的miRNA mimics或直接基因合成构建表达pre-miRNA的质粒。

4.将靶基因3'UTR的双荧光素酶报告基因载体和miRNA mimics或表达pre-miRNA的质粒共转染293T或Hela细胞。

5.荧光素酶检测共转染细胞24-72h后，进行双荧光素酶检测，验证目的miRNA的靶位点。

双荧光素载体构建服务优势：

1. Ready-to-Use载体，专业的技术咨询

2. 快速基因合成，最短载体构建周期

3. 去内毒素的大量质粒制备，可直接用于细胞转染

4. 有竞争力的价格体系

miRNA表达检测之qPCR

miRNA广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中，调控生物体生长发育和疾病发生等过程中相关基因的表达。miRNA的异常表达可能会导致生理状态的异常和疾病的产生，在多种癌症中，其表达水平会发生明显改变，有可能起到原癌基因和抑癌基因的作用。此外，在许多其他病变组织和细胞中也检测到了miRNA的异常表达。因此，对miRNA表达的研究具有重要意义。

miRNA长度很短，无法用Oligo (dT)18或6N进行逆转录，泓迅科技提供茎环法逆转录引物、相应的扩增引物和/或特异性TaqMan探针合成方案，即可对其进行荧光定量。除常用的染料法和TaqMan探针外，还可选择设计合成TaqMan-MGB探针，其探针设计得更短，特异性更高。

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