利用NMR解析蛋白高能态的高分辨率结构
腺苷酸激酶 (adenylate kinase, Adk) 的构象变化与其酶促反应周期密切相关,其低能态的闭合状态在晶体结构中已被解析,但高能的活化状态的存在只被间接证实。利用PCS-CPMG,研究人员发现Adk催化核心及AMP lid部分表观PCS的变化更大,提示高能态中ATP lid和AMP lid处于开放状态,且这一开口的大小实际小于此前的认知5(图1)。
图3. PCS-CPMG在其他蛋白中的应用,左图为calmodulin,右图为Src激酶
4.Nerli, S., McShan, A. C. & Sgourakis, N. G. Chemical shift-based methods in NMR structure determination. Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 106-107, 1–25 (2018).
5.Aviram, H. Y. et al. Direct observation of ultrafast large-scale dynamics of an enzyme under turnover conditions. Proc. Natl Acad. Sci. USA 115, 3243–3248 (2018).
来源: 结构生物学高精尖创新中心
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