含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生物，尤其涉及含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、急慢性肾脏疾病导致的肾功能衰竭严重威胁人类健康，传统的药物治疗和透析治疗难以逆转肾脏结构的损伤和肾功能的持续下降，ⅰ型糖尿病肾病、肾小球肾病、慢性肾炎等在疾病进展过程对肾脏造成损伤，造成肾小球滤过率持续下降，肾实质内瘢痕的堆积成肾纤维化，纤维基质沉淀扰乱器官结构，减少血液供应，纤维化会降低组织修复能力，最后不可避免的会进展为终末期肾病。肾前体细胞(renal progenitors)分布在肾小管和肾小囊中，能够分化成为肾小管细胞和肾足细胞，恢复肾功能，逆转肾损伤，是肾组织修复最重要的细胞。体外构建肾前体细胞培养体系，研究肾前体细胞对肾脏疾病模型的治疗作用，对于研究慢性和急性肾脏疾病的意义重大。

2、利用胚肾分离得到肾前体样细胞的难度大，细胞连续传代能力有限。从尿液中分离筛选取得肾前体细胞的方法存在引入外源微生物污染的问题，且该种方法得到的前体细胞通过血液系统回输后无法实现定植。由胚胎干细胞或ips细胞诱导分化形成的肾前体样细胞有发展成畸胎瘤的风险。

3、因此，有必要开发新型的含肾前体样细胞的生物制剂。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供新型的含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用，以利于受损肾组织的再生或修复。

2、为实现上述目的，本发明的生物制剂包括阳性表达cd133、cd24和cd44的肾前体样细胞，具有强的连续传代能力，能够抑制肾脏组织成纤维化进程，促进肾组织再生或修复。

3、优选的，所述肾前体样细胞为上皮组织来源前体样细胞。具体的，所述肾前体样细胞具有上皮前体细胞特征。

4、所述的“上皮组织”为被覆上皮。具体的，所述上皮组织来源前体样细胞来源于肾皮质组织。

5、优选的，所述肾前体样细胞还阳性表达cd73和sox9中的至少一种。

6、优选的，所述肾前体样细胞阳性表达cd133、cd24、cd44、cd73和sox9。

7、优选的，所述肾前体样细胞还阴性表达至少一种mhc二类分子。具体的，所述肾前体样细胞还阴性表达hla-dr、hla-dp和hla-dq的至少一种。

8、优选的，所述肾前体样细胞还阴性表达cd34和cd45中的至少一种。

9、优选的，所述肾前体样细胞阴性表达hla-dr、hla-dp、hla-dq、cd34和cd45。

10、所述生物制剂的制备方法包括：使用扩增转化培养基对肾原代细胞进行体外培养，得到阳性表达cd133、cd24和cd44的肾前体样细胞。

11、所述扩增转化培养基包含基础培养基，以及以占所述基础培养基的体积含量计的以下成分：

12、15-25纳克/毫升的表皮细胞生长因子egf，40-60纳克/毫升的碱性成纤维细胞生长因子bfgf，体积百分比为0.5％-1.5％的n2添加剂，体积百分比为0.5％-1.5％的b27添加剂，5-15微摩尔/升的rock激酶抑制剂，2-4微摩尔/升的糖原合成酶激酶3β抑制剂，0.5-1.5微摩尔/升的tgf-β信号抑制剂，体积百分比为0.5％-1.5％的补充剂its，不超过1纳摩尔/升的地塞米松，5-15纳克/毫升的血小板源生长因子pdgf，体积百分比为1-10％的血清。其中，补充剂its为胰岛素-转铁蛋白。

13、优选的，所述基础培养基由体积比为3:1-1:1的dmem/f12培养基和mcdb培养基组成。

14、优选的，mcdb培养基为mcdb-131培养基。

15、优选的，所述rock激酶抑制剂为fasudil、y-27632、thiazovivin和sb-772077-b的任意一种。

16、优选的，所述tgf-β信号抑制剂为repsox、sb431542和a83-01的任意一种。

17、优选的，所述糖原合成酶激酶3β抑制剂为bio、chir99021和tws119中的至少一种。

18、本发明还提供了所述生物制剂在肾病治疗药物制备方面的应用。

技术特征：

1.一种生物制剂，其特征在于，包括肾前体样细胞，所述肾前体样细胞阳性表达cd133、cd24和cd44。

2.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述肾前体样细胞还阳性表达cd73和sox9中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述肾前体样细胞还阴性表达hla-dr、hla-dp、hla-dq、cd34和cd45中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述肾前体样细胞为上皮组织来源前体样细胞。

5.根据权利要求4所述的生物制剂，其特征在于，所述上皮组织来源前体样细胞来源于肾皮质组织。

6.一种生物制剂的制备方法，其特征在于，包括：

7.根据权利要求6所述的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述基础培养基由体积比为3:1-1:1的dmem/f12培养基和mcdb培养基组成。

8.根据权利要求6所述的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述rock激酶抑制剂为fasudil、y-27632、thiazovivin和sb-772077-b的任意一种，所述tgf-β信号抑制剂为repsox、sb431542和a83-01的任意一种，所述糖原合成酶激酶3β抑制剂为bio、chir99021和tws119中的至少一种。

9.根据权利要求6所述的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述肾前体样细胞还阳性表达cd73和sox9中的至少一种，阴性表达hla-dr、hla-dp、hla-dq、cd34和cd45中的至少一种。

10.一种生物制剂在治疗肾病药物的制备方面的应用，其特征在于，所述生物制剂包含阳性表达cd133、cd24和cd44的肾前体样细胞。

11.根据权利要求10所述的生物制剂在治疗肾病药物的制备方面的应用，其特征在于，所述肾前体样细胞还阳性表达cd73和sox9中的至少一种，阴性表达hla-dr、hla-dp、hla-dq、cd34和cd45中的至少一种。

技术总结
本发明提供了一种含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用。所述生物制剂包括阳性表达CD133、CD24和CD44的肾前体样细胞，具有强的连续传代能力，能够抑制肾脏组织成纤维化进程，促进肾组织再生或修复。

技术研发人员：周伸奥,张琴
受保护的技术使用者：上海赛立维生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16