高灵敏、低残留tNGS产品助力感染性疾病检测聚焦核心病原
作者： 小桔灯网
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近年来全球感染性疾病的发病率有所上升，病原体呈现多样化和复杂化的发展趋势，半数患者存在病原体不明的困境，病原体的快速诊断面临严峻挑战。目前用于临床病原体检测的方法主要包括传统培养法、PCR法、宏基因组测序（mNGS）、病原靶向测序（tNGS）等。新冠核酸检测让荧光PCR技术大放异彩，新冠之后宏基因组测序mNGS抗疫扬名，一度被临床医生所青睐，逐步走向寻常百姓家。tNGS靶向测序技术更是异军突起，以其对“PCR”和“NGS”兼容并蓄的优势和快速、精准、高性价比的测序服务，在临床检验领域正受到越来越多的关注和使用。
表1.病原体检测方法比较
更快、更精准、更经济
—tNGS靶向测序
靶向基因测序（tNGS），又称病原体靶向测序。当前tNGS技术可进一步延伸为PCR扩增子富集测序和基于探针杂交的捕获富集测序，两种均需要标本前处理、核酸提取，但富集方法略有差异：
PCR扩增子富集：
采用两轮PCR法，第一步PCR是目标序列与基因特异性引物的结合，扩增目标序列；第二步是通过PCR引入带有Index序列的测序通用接头，并对目标序列进行富集，纯化后即可完成检测文库的构建。
靶向富集技术（TE）：
常规文库构建后，设计与病原体参考序列互补的小RNA/DNA探针，探针靶向富集使整个基因组被重叠探针所覆盖，杂交反应捕获靶标序列。
靶向扩增子富集
靶向探针捕获富集流程
目前每种技术路线在临床应用方面都有其不可替代的优势，同时也有暂时无法解决的问题。未来很长一段时间，tNGS扩增子测序法和捕获检测仍会长期并存，为患者提供全方位、高性价比的检测体验。为临床提供对的检测，而不是多的检测，让病原检测回归理性检测是大势所趋。
翌圣tNGS多重扩增产品
覆盖感染疾病领域多需求
翌圣通过ZymeEditorTM双向分子酶理性设计与定向进化平台开发多种高性能分子酶，搭配超低残留分子酶生产工艺与UCF.ME®超洁净分子酶生产基地，可规模化提供用于tNGS建库的全套高性能产品和超低残留分子酶原料，助力解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度，实现感染临床“轻-危-急”需求的全面覆盖。
高灵敏、超低残留分子酶原料：
Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polymerase 低宿主DNA残留的Taq DNA聚合酶
宿主DNA残留低：E. coli基因组DNA残留＜0.5 copies/ 100 U；
核酸酶残留低：无核酸外切酶、切口酶、RNase残留；
线性范围广：在qPCR检测体系中，检测线性范围为1×106 copies/T-1×101 copies/T；
稳定性好：4℃、37℃处理14天，酶活无明显变化。
以1×106 copies/T的KRAS基因重组质粒为高浓度模板，后续依次以10倍梯度稀释，直到1×101 copies/T，检测线性范围，相关性R2=0.9956。
不同批次Taq DNA 聚合酶进行宿主（E.coli）基因组DNA残留检测，结果显示宿主基因组DNA残留远低于0.1 copies/ 100 U。
翌圣均一性多重扩增产品
4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix For Pathogen 4×病原多重PCR预混液
操作简洁：高乘预混液包含除引物和DNA模板之外所有组分
性能优：高均一性、高特异性和高灵敏度，背景残留低
兼容广：兼容GC含量在25%-70%
兼容多种应用场景：tNGS病原微生物检测、环境微生物鉴定和食品安全检测等。
表2. 使用zymo病原DNA标准品，分别进行酶切建库和tNGS多重扩增，测序结果显示10种微生物均可有效检出。
共建库试剂盒
Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit DNA/RNA快速共建库方案
一管式建库：DNA&RNA一管式建库，一步高效完成cDNA合成，
降低建库时间和成本：2.9 h内完成共建库，其中cDNA合成耗时35 min，酶切法建库耗时2.3 h；
背景菌残留低：在常见10-100 ng RNA建库场景，大肠等常见工程菌残留符合要求，试剂较为纯净
表3. 使用共建库试剂盒，搭配不同比例的小牛gDNA和293 RNA样本，2.9 h内完成共建库
极致交付、高性价比，一直是感染性疾病患者的心声。随着PCR、mNGS和tNGS检测技术的不断发展，从核酸提取到文库构建的各个环节，在临床应用中还有很多实际问题需要解决。翌圣生物将会持续优化产品性能，开发出更符合临床应用的解决方案，助力感染性疾病精准诊断！
表4. 翌圣病原检测产品解决方案
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